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大鼠Elisa试剂盒样品处理及保存方法

发布时间:2022-09-26   点击次数:66次
  大鼠Elisa试剂盒是通过酶联免疫吸附反应进行实验来检测特定物质的试剂盒,试剂盒中会有不同浓度的标准样品,在酶标条中通过固相的抗原或抗体,酶标记的抗原或抗体,酶作用的底物反应可形成标准曲线,从而进行试验样品的测定。
  大鼠Elisa试剂盒的样品收集、处理及保存方法:
  1.血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
  2.血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
  3.细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
  4.组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
  5.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
  大鼠Elisa试剂盒操作步骤:
  1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数,取出所需板条放置在框架内,暂时用不到板条请放回铝箔袋密封,保存于4℃。
  2.建议设置本底较正孔,即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。
  3.分别将标本或不同浓度标准品(100u1/孔)加入相应孔中,用封板胶纸封住反应孔,室温孵育120分钟。对于血清或血浆标本,请加入50u1样本分析缓冲液后加50u1标本,如稀释量大,请将样本与样本分析缓冲液等量加入,不足部分用标准品稀释液补充至100ul。
  4.洗板5次,且置厚吸水纸上拍干。
  5.加入生物素化抗体工作液(100u1/孔)。用封板胶纸封住反应孔,室温孵育60分钟。
  6.洗板5次,且置厚吸水纸上拍干。
  7.加入酶结合物工作液(100u1/孔)。用封板胶纸封住反应孔,避光室温孵育20分钟。
  8.洗板5次,且置厚吸水纸上拍干。
  9.加入显色剂TMB100u1/孔,避光室温孵育20分钟。
  10.加入终止液50u1/孔,混匀后即刻测量0D450值。
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